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伯樂bio-rad轉印槽的使用方法步骤
点击次数:11 发布时间:2019-08-27 打印本頁面 返回
伯樂bio-rad轉印槽的使用方法步驟:
  全程请戴手套操作,以免污染伯樂bio-rad轉印槽!
  1)电泳后SDS-PAGE 胶片浸在转印缓冲液中,洗2~3 次,每次10min.
  2)取出伯樂bio-rad轉印槽,先小心放一搅拌子在底部,再倒一半转印缓冲液。
  3)取转印纸切成约如胶片大小,先在方形培养皿中以少许甲醇浸湿数秒钟,再置入伯樂bio-rad轉印槽中的缓冲液10 min 后使用。 另取两张滤纸,以及两片方形海绵垫,都放在伯乐转印槽的缓冲液中备用。
  4)取出轉印夾打開平放,先墊一張方形海棉墊,鋪上一張濕濾紙,小心平鋪SDS-PAGE膠上去,然後小心叠上已潤濕的轉印紙,用塗菌玻璃棒趕出氣泡;轉印紙再滴上數滴緩沖液後,加蓋一層濾紙,及另一張海綿,也都不可陷入氣泡,即可把整個轉印三明治卡夾裝好。
  膠叠到轉印紙時,一次成功,不要重作,否則蛋白質色帶可能會印上去,産生重叠影像。
  5)将转印三明治置入已经放有一半转印缓冲液的伯樂bio-rad轉印槽中,注意有转印纸的那一面向正极(红色),胶片那面向负极(黑色)。
  6)当三明治都放入伯樂bio-rad轉印槽后,以转印缓冲液盖满所有的三明治,小心动一动卡夹,除去附在卡夹内外的气泡,盖上盖子,放到一搅拌器上,打开搅拌器开始搅拌,同时接好电源,装置完成后放置10 min.
  7)以300mA开始转印,温度会渐渐上升,转印1.5 h左右 后中止转印,取出转印三明治,打开后依次取出转印纸及胶。
  具體轉印條件要根據蛋白的大小進行優化,注意低溫。
  8)轉印後的膠片可以繼續進行染色,看有無蛋白質殘留。若電泳時加有藍色標准蛋白質marker(SeeBlue),則可在轉印紙上看到藍色的色帶,確定轉印成功,並可評估轉印效率。
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